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UV1901PC紫外可見分光光度計測牛奶中蛋白質含量

納氏試劑分光光度法測定乳與乳制品中蛋白質乳及乳制品是人們喜愛的常用保健食品，蛋白質含量的高低是其重要指標。蛋白質的測量方法凱氏定氮蒸餾法，樣品消化后需要蒸餾滴定，操作繁雜，勞動力大，費時費力。納氏試劑分光光度比色法測定，方法簡便快捷，靈敏穩定。與原方法經T檢驗比較，無顯著性差異。

UV1901PC紫外可見分光光度計測牛奶中蛋白質含量的原理

樣品中蛋白質與硫酸和催化劑一同加熱分解，分解的氨與硫酸生產硫酸銨，硫酸銨與納氏試劑在堿性情況下生成黃至棕色化合物，與樣品氮含量成正比。結果乘以換算系數，從而計算樣品中蛋白質含量。

UV1901PC紫外可見分光光度計測牛奶中蛋白質含量需用到的試劑

硫酸  分析純  、硫酸鉀分析純、硫酸銅分析純 納氏試劑  溶解17g氯huagong于300ML水中，另溶解35g碘化鉀于100ml水中，將前液緩慢加入后液中至生成紅色沉淀為止，加入600ML200g/l氫氧化鈉溶液和剩余的氯huagong，儲存于深色瓶，靜置數日，取上清液于另一深色瓶內用橡皮塞塞緊，避光保存。硫酸銨標準溶液  精密稱取80℃干燥的硫酸銨4.71g溶于0.01mol/l硫酸溶液中并定容至1000ml。此溶液為1.0mg/ml NH3-N.臨用前用0.01mol/l H2SO4稀釋至10.0ug/ml NH3-N.所需用水均為離子交換水或無銨蒸餾水。

紫外可見分光光度計測牛奶中蛋白質含量主要儀器

UV1901PC紫外可見分光光度計

UV1901PC紫外可見分光光度計測牛奶中蛋白質的實驗方法

UV1901PC紫外可見分光光度計測牛奶中蛋白質的樣品處理

精密稱取0。2~1.0g固體樣品或稱取5~10ml液體樣品于250ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸銅，3g硫酸鉀及10ml硫酸，搖勻后于瓶口放一小漏斗，傾斜置有小孔的石棉網隔熱的電爐上，先小火加熱，至樣品炭化泡沫停止后，加大火力至液體呈藍色澄清透明后，繼續加熱0.5h，取下放冷，小心加水，冷后分次洗入100ml容量瓶定容至刻度，準確吸取5ml定容后樣品消化液于一100ml容量瓶，用水定容至刻度。即樣品消化液稀釋液備用，同時做試劑空白。準確吸取2.0-5.0ml樣品消化稀釋液和等量空白消化液0.0、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、10.00ml分別于50ml納氏比色管內，用0.01mol/l硫酸定容至刻度混勻，每管分別加入1.00ml納氏試劑，混勻，10min后420nm波長，1.0CM比色皿蒸餾水校正零點比色，繪制回歸標準曲線。

計算樣品測定液和空白測定液中氮的含量

圖1

方法與討論

方法的線性范圍，相關系數

氮含量在0.1-2.0ug/ml范圍內線性良好，相關系數R=0.9993.

精密度試驗取2份奶粉各分別測定6次結果見表1。

回收率和精密度

向氨基酸口服液中加入標準溶液進行回收率試驗，并進行10次平行試驗計算平均回收率和精密度。回收率和精密度均相當好。

方法應用

應用本方法測定了多份口服液、氨基酸沖劑、飼料等，方法重現性、回收率均令人滿意。

結語

不經衍生直接測定樣品中游離氨基酸，分析速度快，靈敏度高，定性和定量準確，適合各種樣品中游離氨基酸的測定。

UV1901PC紫外可見分光光度計法測定乳及乳制品中的蛋白質含量，消耗試劑少，試劑成本低、降低勞動強度，能滿足基層工作需要、簡便、快速、靈敏、不失為一種好方法。